Качественные реакции на белок (цветные)

Эти реакции применяются для распознавания белковых веществ и определения их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях, а именно:

1. Определение количества белка в плазме крови
2. Определение аминокислот в крови и моче
3. Для выявления наследственных или приобретенных нарушений обмена веществ у новорожденных

К цветным реакциям относятся:

1. Биуретовая реакция. Это качественная реакция на пептидную связь. Эта реакция является универсальной для всех белков, так как она открывает наличие не менее 2-х пептидных связей в белке. В основе биуретовой реакции лежит способность пептидных связей в щелочной среде образовывать с сульфатом меди CuSO₄ окрашенное комплексное соединение, цвет которого зависит от длины полипептидной цепи. Раствор белка (нативного) дает сине-фиолетового окрашивания.
2. Ксантопротеиновая реакция. Это качественная реакция на циклические аминокислоты, содержащиеся в белке. При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты HNO₃ и нагревании появляется желтое окрашивание, которое в присутствии щелочи переходит в оранжевое. Сущность этой реакции состоит в том, что при наличии циклических аминокислот в белке появляется желтое окрашивание за счет нитрованного бензольного кольца с образованием нитросоединений, выпадающих в осадок.
3. Реакция Фоля. Эта качественная реакция на серосодержащие аминокислоты в белке (цистеин, цистин, метионин). Сущность этой реакции состоит в том, что аминокислоты содержащие сульфгидрильные группы -SH, подвергаются щелочному гидролизу с образованием сульфида натрия Na2S, который с солями свинца образуют осадок сульфида свинца PbS черного или бурого цвета. Эта реакция протекает в два этапа: на первом этапе происходит отщепление SH-группы аминокислоты и переход серы из органического соединения в неорганическое; на втором этапе качественное обнаружение ионов серы в растворе.
4. Нингидриновая реакция. Эта реакция характерна для аминогрупп -NH₂ в альфа-положении и обусловлена наличием альфа-аминокислоты в молекуле белка. При нагревании белка с водным раствором нингидрина происходит распад аминокислот на углекислый газ и аммиак, соответствующий аминокислоте альдегид и восстановленный нингидрин, который затем конденсируется со своей окислонной формой и аммиаком с образование окрашенного продукта, т. е. с образованием продута конденсаци нингидрина с аминокислотой фиолетово-синего или красно-фиолетового цвета. Этот продукт называется дикетогидриндилидена-дикетогидриндамина (ДИДА). Эту реакцию широко используют в биохимической лаборатории для количественного определения аминокислоты в биологических жидкостях (кровь, моча, спинномозговая жидкость и др.), а также для количественного определения белков и пептидов.